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                Pull Down Assay

                服务简介

                GST-pull-down

                利用GST融合蛋白沉降技术,将靶蛋白与GST标签蛋白进行融合表达,纯化获取融合表达蛋白。靶蛋白-GST融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽亲和树脂上,作为与目的反比亲和的支撑物,充当诱饵蛋白,目的蛋白溶液过柱纯化,即可捕获与之相互作用的俘获蛋白,洗脱结合物,通过SDS-page电泳分析,或联用WB和MS检测,可验证蛋白间的相互作用或筛选获取相应的目的蛋白。

                RNA/DNA pull-down

                Pull down是检测RNA/DNA结合蛋白与其靶RNA/DNA之间相互作用的主要实验手段之一。用生物素标记RNA/DNA 探针,与胞浆蛋白提取液孵育,形成RNA/DNA—蛋白质复合物。该复合物可与链亲和素标记的磁珠结合,从而与孵育液中的其他成分分离。复合物洗脱后,通过Western Blot实验检测特定的RNA/DNA结合蛋白是否与RNA/DNA相互作用,还可以对该蛋白进行质谱(MS)鉴定蛋白质类型。

                主要流程

                GST-pull-down

                构建GST-靶蛋白融合表达载体 WB检测融合蛋白的表达 获取总蛋白裂解液 GST-pull-down调取互作结合蛋白 对结合蛋白进行纯化与分析

                RNA/DNA pull-down

                RNA/DNA生物素探针制备 细胞裂解液制备 .获取总蛋白裂解液 pull-down调取互作结合蛋白 对结合蛋白进行纯化与分析

                订购信息

                服务项目

                说明

                周期

                GST-pull down

                通过磁珠结合捕获,形成复合体形式,更加灵敏和针对性获取结合蛋白:磁珠与GST抗体孵育结合,通过与样品裂解液孵育,形成磁珠-GST抗体-GST融合蛋白-互作结合蛋白综合体,进而纯化获取目的结合蛋白.

                8~10周

                RNA pull down

                需要相关文献及客户的要求,根据基因序列进行DNA序列T克隆,做外转录成RNA,再进行生物素标记,与细胞裂解液结合分离结合蛋白。

                8周

                DNA pull down

                可以直接合成生物素标记DNA探针,与细胞裂解液结合,磁珠法筛选分离离结合蛋白。

                4~6周

                GST-pull-down

                客户提供

                提供样品
                1) 构建表达纯化靶蛋白与相关诱饵蛋白(也可由公司构建)或含诱饵蛋白的细胞样品
                2) 可用于WB检测和IP实验的GST标签抗体

                交付

                交付结果
                1) 原始数据、结果图片
                2) 标准实验报告(含实验步骤、流程及试剂耗材厂家)
                 

                RNA/DNA pull-down

                客户提供

                提供样品
                1) 需检测的细胞样品
                提供信息
                1) 目的基因信息;
                2) 目的蛋白信息;
                3) 一抗及其说明书

                交付

                交付结果
                1) 原始数据、结果图片
                2) 标准实验报告(含实验步骤、流程及试剂耗材厂家)