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                DNase I footprinting assay(DNase I足迹分析实验)

                服务简介

                DNase I footprinting是一种精确鉴定DNA结合蛋白(如转录调控蛋白)在DNA分子上的结合位点的检测方法。转录调控蛋白通过与启动子区域结合来调控靶标基因的转录。目前,凝胶阻滞实验(EMSA)和DNase I足迹分析实验是重要的一套体外研究工具:凝胶阻滞实验可以确定转录因子是否与DNA直接结合,而DNase I足迹分析实验则可以精确鉴定其结合的DNA序列,从而帮助我们研究基因转录调控的机制。经典的DNase I足迹分析实验需要使用同位素进行标记,不仅危险,而且费时、对操作者的技术要求高、成功率低。针对这种情况,本公司利用“荧光标记”结合ABI测序仪的方法来进行DNase I足迹分析实验。优点是:由于可以进行DNA的精确定量,并可以在常规的实验台上面操作;可重复性要远远好于同位素操作;ABI测序仪的操作体系非常成熟,灵敏度高,重复性好。因此,荧光标记法更灵敏度,获得的保护区域更清晰,图片的质量更好。

                主要流程

                蛋白与探针结合 DNase I梯度酶切 ABI测序仪检测 确定检出的蛋白保护序列

                订购信息

                服务项目

                说明

                周期

                探针制备及与蛋白结合

                客户提供准确的DNA结合蛋白的序列范围序列,或根据文献设计探针合成

                1~2周

                DNase I梯度酶切

                需要进行反复摸索条件达到对DNA部分酶切的效果。

                1~2周

                ABI测序仪检测

                检测结果进行图片与数据处理,确定检出的蛋白保护序列,并提供可发表图片。

                3~5个工作日

                客户提供

                提供样品
                1) 纯化的蛋白;

                2) DNA样品及引物序列;

                提供信息
                1) 提供EMSA结果图及实验参数以便于接下来的DNase I足迹分析实验。
                交付结果
                1) 原始数据、结果图片
                2) 完整的实验报告(含实验步骤、流程及试剂耗材厂家)